在烟草中瞬时表达人角质细胞生长因子1

目的 在烟草中瞬时表达人角质细胞生长因子1(Keratinocytegrowth factor1,KGF1),旨在寻求一种低成本、方便、大量生产rhKGF1的方法.方法 以重组质粒pET3c-hKGF1为模板,通过PCR法扩增hKGF1基因片段,插入经改造的马铃薯病毒X双元表达载体pGR 107中,冻融法转化感受态农杆菌GV3101,以获得的GV3101-pGR107-rhKGF1侵染烟草.以绿色荧光蛋白基因(smGFP)为报告基因,建立马铃薯X病毒(PVX)瞬时表达体系.用紫外灯连续20 d观察经GV3101-pGR107-smGFP侵染的烟草中smGFP的表达.经RT-PCR法分析烟草中rhKGF1基因mRNA的转录,SDS-PAGE 、Western blot分析烟草中rhKGF1蛋白的表达.结果 重组表达质粒pGR107-rhKGF1经PCR及测序证实构建正确；转化的农杆菌GV3101-pGR 107-rhKGF1侵染的烟草中目的蛋白的表达量在第8天达最大.目的蛋白rhKGF1在烟草中获得成功表达.结论 在烟草中瞬时表达了rhKGF1,为其单克隆抗体的制备及产业化奠定了基础.