人ERβ AF1融合蛋白的表达及其多克隆抗体制备

目的:制备雌激素受体β多克隆抗体。方法:从人乳腺cDNA文库中PCR扩增ERβ AF1结构域(1~144位氨基酸),DNA重组插入原核表达质粒pGEX-KG,转化大肠杆菌DH5α,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达GST-ERβ AF1融合蛋白。纯化后免疫BALB/c小鼠,制备鼠多抗血清。通过Western blot和免疫组织化学实验鉴定血清特异性和效价。结果:成功构建了pGEX-KG/ERβ AF1原核表达载体,转化DH5α后可高效表达融合蛋白GST-ERβ AF1,免疫产生的ERβ多抗可特异检测ERβ真核表达载体转染人293T细胞及乳腺癌细胞中ERβ的表达。结论:制备的ER抗体对ERβ有反应原性,效价高,特异性好,为进一步研究ERβ的生物学功能奠定基础。