VEGF基因表达抑制对胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响
World Chinese Journal of Digestology(2006)
摘要
目的:研究siRNA(small interfering RNA)对人胃腺癌细胞SGC-7901的VEGF基因表达的影响.方法:选择血管内皮生长因子(VEGF)基因为靶基因,设计两组针对VEGF mRNA的小干扰RNA,合成DNA寡核苷酸链,体外转录合成siRNA.以人胃腺癌细胞系SGC-7901为靶细胞,应用脂质体转染的方法,将siRNA导入细胞.采用Hoechst33258染色观察siRNA作用于SGC-7901细胞中出现凋亡小体的情况.流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT-PCR法比较转染前后VEGF mRNA表达水平的变化, ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化.结果:两组siRNA转染后均能有效地抑制 SGC-7901细胞的生长,诱导细胞凋亡产生凋亡小体.siRNA作用于SGC-7901细胞.其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0/G1 期细胞增多,S期细胞减少,并使细胞周期阻滞于G0/G1期(siRNA1组,siRNA2组G0/G1期VS 对照组G0/G1期:75.04%,76.52% vs 58.37%, P<0.01;siRNA1组,siRNA2组S期vs对照组S 期:17.82%,16.73% vs 39.52%,P<0.01),而其他组则无明显变化.VEGF mRNA的表达量大幅度减少(siRNA1组,siRNA2组vs对照组: 0.638±0.078,0.656±0.085 vs 0.941±0.046, P<0.01),相对应的VEGF蛋白水平也显著降低(164.7±22.7,166.3±26.6 vs 414.0±61.5, P<0.01),而其他组siRNA转染后则无上述作用.结论:应用靶向VEGF基因RNA干扰技术可以有效抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖.
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关键词
Vascular endothelial growth factor,SGC-7901,Gastric cancer,RNA interference
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