RNA干扰HCCR-2基因表达对食管癌EC9706细胞凋亡及周期的影响

目的采用RNA干扰技术探讨人宫颈癌癌基因-2(HCCR-2)对人食管癌细胞凋亡及增殖周期的影响及其可能的分子机制。方法采用脂质体介导将pGCsi-shHCCR-2与pGCsi质粒转染人食管癌细胞株EC9706,经G418筛选获得稳定抑制HCCR-2表达的食管癌细胞模型;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测转染细胞HCCR-2、P21、P27 mRNA与蛋白表达;流式细胞仪检测各组细胞凋亡及增殖周期。结果成功构建稳定抑制HCCR-2表达的食管癌细胞模型。反义组、空载体组和对照组细胞HCCR-2mRNA表达量分别为0.19±0.07、0.43±0.22、0.45±0.21;相应的P21 mRNA表达量分别为0.25±0.09、0.12±0.04、0.11±0.05;相应的P27 mRNA表达量分别为0.28±0.13、0.13±0.05、0.15±0.08;相应的HCCR-2蛋白表达量分别为0.42±0.23、0.88±0.41、0.91±0.46;相应的P21蛋白表达量分别为0.78±0.34、0.36±0.15、0.35±0.17;相应的P27蛋白表达量分别为0.81±0.38、0.41±0.17、0.43±0.24,较其他组,反义组细胞HCCR-2 mRNA及蛋白表达量显著降低(P<0.01),而P21、P27 mRNA及蛋白表达量显著增加(P<0.01)。反义组、空载体组和对照组细胞凋亡率分别为(19.64±3.35)%、(6.75±0.91)%、(6.79±0.98)%,反义组较其他组细胞凋亡显著增加(P<0.01);相应的G0/G1期细胞百分数分别为(56.58±11.37)%、(41.32±8.52)%、(42.65±8.63)%,反义组较其他组处于G0/G1期细胞数显著增加(P<0.01)。结论下调EC9706细胞HCCR-2表达后,细胞凋亡增加,细胞周期出现G0/G1期阻滞,其作用机制与P21与P27表达增加有关。