弓形虫β-酮脂酰ACP合成酶的表达及鉴定

目的 构建刚地弓形虫β-酮脂酰ACP合成酶(FABZ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,建立检测和定位虫体FABZ蛋白表达的方法.方法 运用RT-PCR技术扩增弓形虫RH株速殖子fabz基因,克隆至pET32a(+)载体,在大肠杆菌Rosetta中诱导表达.Ni-NTA亲合层析柱纯化重组FABZ蛋白并制备其兔多克隆抗体.采用免疫印迹(Western blotting)技术和间接免疫荧光技术(IFA)检测和定位FABZ在虫体内表达.结果 成功表达重组FABZ蛋白,并制备其多克隆抗体.Western blotting技术检测出虫体转运肽型FABZ蛋白(t-FABZ)和成熟型FABZ蛋白(m-FABZ),IFA技术检测出分布于核周内质网和顶质体的FABZ蛋白.结论 通过制备多克隆抗体,用Western blotting技术和IFA技术能检测和定位FABZ蛋白在虫体内表达,该方法在顶质体蛋白研究中具有较高的应用价值.