硒减轻高糖诱导的血管平滑肌钙化的机制研究

目的 探讨硒通过抑制线粒体分裂而减轻血管平滑肌钙化的作用机制.方法 将大鼠平滑肌细胞分为低糖组、高糖组、低糖+硒组及高糖+硒组.低糖组用低糖培养液培养细胞,高糖组用高糖培养液培养细胞,低糖+硒组用低糖培养液和亚硒酸钠共培养细胞,高糖+硒组用高糖培养液和亚硒酸钠共培养细胞,每组细胞均培养 14 d.采用茜素红染色检测钙沉积情况、碱性磷酸酶(ALP)活性试剂盒检测细胞ALP活性、荧光定量PCR检测平滑肌细胞收缩表型α-SMA、成骨表型RUNX2、OCN及线粒体分裂因子Drp1、融合因子Mfn1 相对表达水平,用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(ROS)的生成情况.结果 茜素红染色结果显示,高糖组细胞钙沉积明显高于低糖组及高糖+硒组.低糖组、高糖组及高糖+硒组细胞ALP活性逐渐下降(P＜0.05).高糖组细胞成骨表型RUNX2、OCN相对表达水平均显著高于低糖组,收缩表型α-SMA相对表达水平明显低于低糖组;高糖+硒组细胞收缩表型α-SMA相对表达水平明显高于高糖组,但低于低糖+硒组,成骨表型RUNX2、OCN相对表达水平均明显低于高糖组,但高于低糖+硒组(P＜0.05).高糖组细胞线粒体分裂因子Drp1 相对表达水平显著高于低糖组,而线粒体融合因子Mfn1 相对表达水平显著低于低糖组;低糖+硒组细胞Drp1 相对表达水平明显低于低糖组,而线粒体融合因子Mfn1相对表达水平明显高于低糖组;高糖+硒组细胞线粒体分裂因子Drp1 相对表达水平显著低于高糖组,而线粒体融合因子 Mfn1 相对表达水平显著高于高糖组,但低于低糖+硒组(P＜0.05).DCFH-DA检测结果显示,高糖组细胞ROS荧光信号显著多于低糖组及高糖+硒组,而加入Drp1抑制剂Mdivi-1 后,仅高糖组细胞ROS荧光信号较同组加入前明显降低.结论 硒通过抑制高糖诱导的线粒体分裂而稳定线粒体动力学变化,进而减少细胞内氧化应激的产生,最终有效抑制血管平滑肌钙化的进展.