银杏二萜内酯K对D-半乳糖诱导的小鼠原代星形胶质细胞抗衰老作用

目的 研究银杏二萜内酯K(ginkgolide K,GK)对D-半乳糖诱导的小鼠原代星形胶质细胞抗衰老作用及可能机制.方法 以小鼠原代星形胶质细胞为研究对象,建立D-半乳糖诱导的衰老模型,设置对照组、模型组和GK组,GK(50μg/mL)预处理3 h后,以150 mmol/LD-半乳糖造模6d,采用β-半乳糖苷酶染色法检测衰老星形胶质细胞;Western blotting法测定衰老标志蛋白(p21、p53和Lamin B1)、沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF、自噬标志蛋白微管相关蛋白 1 轻链 3-Ⅱ/Ⅰ(microtubule associated protein 1 light chain 3-Ⅱ/Ⅰ,LC3-Ⅱ/Ⅰ)和自噬选择性底物p62表达;ELISA检测衰老相关分泌表型[白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)];免疫荧光检测增殖标志分子Ki67表达.结果 与对照组比较,D-半乳糖显著诱导原代星形胶质细胞β-半乳糖苷酶阳性表达(P＜0.001),促进衰老标志蛋白p21、p53的上调和Lamin B1的下调(P＜0.05、0.01),减少增殖标志分子Ki67的表达(P＜0.01),表明成功构建了公认的细胞衰老模型.与模型组比较,GK显著减少β-半乳糖苷酶阳性表达(P＜0.001),下调p21、p53和上调LaminB1蛋白的表达(P＜0.05、0.01),增加Ki67的表达(P＜0.01),表明GK具有抗衰老作用.此外,GK显著促进BDNF蛋白表达.(P＜0.05),减少TNF-α的分泌(P＜0.05),上调SIRT1和自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ表达(P＜0.05、0.01),减少p62蛋白表达(P＜0.01).结论 GK可有效抑制原代星形胶质细胞的衰老,其作用机制可能与上调SIRT1、BDNF表达和促进细胞自噬有关,从而多维度协同达到抗细胞衰老的效应.