沉默Fcgr3降低SiO2诱导的小鼠肺泡巨噬细胞系MH-S炎性因子表达

目的 探讨沉默免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲ(FcγRⅢ)对SiO2诱导的小鼠肺泡巨噬细胞系MH-S炎性因子表达的影响.方法 构建Fcgr3 shRNA的慢病毒质粒;人胚肾细胞系293T培养包装产生慢病毒;慢病毒感染沉默MH-S中的FcγRⅢ,并筛选稳定感染的细胞.定量多聚酶链反应(qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测MH-S巨噬细胞系中FcγRⅢ的mRNA和蛋白表达.将MH-S细胞分为MH-S+sh-NC、MH-S+SiO2+sh-NC、MH-S+sh-Fcgr3和MH-S+SiO2+sh-Fcgr3,其中SiO2处理条件为100 mg/L连续刺激12 h.通过qPCR检测炎性因子转录水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养上清中的炎性因子的含量,包括肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和白介素6(IL-6).结果 包装慢病毒并感染细胞后建立稳定沉默Fcgr3的MH-S细胞系,稳定转染细胞中FcγRⅢ的转录与蛋白表达水平较对照组降低(P<0.05).与对照组相比,SiO2刺激后Tnf、Il1b和Il6的转录水平明显升高(P<0.05),沉默Fcgr3后炎症因子转录水平显著下降(P<0.05);与对照组相比,SiO2刺激后TNF-α和IL-6的分泌量明显升高(P<0.05),沉默Fcgr3后炎症因子分泌水平显著下降(P<0.05).结论 沉默Fcgr3能够降低SiO2诱导的肺泡巨噬细胞炎性因子的表达.