LPA对牦牛卵丘细胞主要卵源因子表达的影响

一定浓度的溶血磷脂酸(lysobisphosphatidic acid,LPA)可以促进卵母细胞成熟,而卵丘细胞以及卵源因子(oocyte-secreted factors,OSFs)能够保障卵母细胞生长发育及功能的正常发挥.本研究旨在对卵丘细胞所分泌的卵源因子受到外源性溶血磷脂酸的调控后,其表达量的变化进行研究.以体外培养的牦牛(Bos grunniens)卵丘细胞为研究对象;添加外源性LPA(0,5,15,30和50μmol/L)进行调控,采用PCR、qPCR、Western blot及间接免疫荧光等方法,检测经LPA调控后卵丘细胞分泌的OSFs的表达变化.qPCR结果显示:当添加的LPA浓度为15μmol/L时,生长分化因子9(growth differentiation factor 9,GDF9)和成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors,FGF10)mRNA的相对表达水平达到最高,浓度大于15μmol/L时,GDF9和FGF10 mRNA的表达水平降低.LPA浓度为30μmol/L时,骨形态发生蛋白1(bone morphogenetic proteins 1,BMP1)和BMP15 mRNA的相对表达水平达到最高,浓度大于30μmol/L时,BMP15 mRNA的表达水平降低,BMP1 mRNA的相对表达水平变化不显著.Western blot结果显示:当LPA浓度为30μmol/L时,GDF9、BMP1、BMP15蛋白的相对表达水平最高,浓度大于30μmol/L时,BMP1、BMP15蛋白的表达水平降低,而GDF9蛋白的表达受到抑制.相比较其他OSFs蛋白对LPA的应答,在一定LPA浓度范围内,FGF10蛋白相对表达水平与LPA的浓度之间呈现剂量依赖性.免疫荧光结果显示:0μmol/L处理组OSFs在卵丘细胞的荧光标记主要集中在细胞质和细胞核,而LPA处理后的样本,OSFs在卵丘细胞细胞质中的荧光标记明显增强.本研究证实,在牦牛卵丘细胞体外培养过程中,外源性LPA能够在基因与蛋白水平上调节OSFs在卵丘细胞中的表达,添加适当浓度的LPA能够增加卵丘细胞相关细胞因子的分泌,进而对卵母细胞的发育进行调节.本研究对于构建牦牛以及其他哺乳动物卵母细胞成熟的体外培养模式具有借鉴意义.