沙眼衣原体主要外膜蛋白多肽多克隆抗体的制备与鉴定

目的 沙眼衣原体主要外膜蛋白(major outer membrane protein,MOMP)在维持沙眼衣原体结构稳定性和衣原体感染宿主细胞过程中发挥重要作用,为深入研究MOMP蛋白的功能及作用机制,使用人工合成多肽制备MOMP多克隆抗体.方法 分析沙眼衣原体MOMP的抗原表位,根据15个沙眼衣原体血清型MOMP保守肽段,设计并合成MOMP特异性肽段,与血蓝蛋白偶联后免疫新西兰兔.采用免疫亲和层析纯化免疫血清,应用SDS?PAGE和ELISA评估血清抗体纯度及效价,利用Western blot和免疫荧光染色鉴定MOMP抗体特异性.结果 纯化后的血清IgG抗体纯度为89.6％,MOMP抗体效价达1:12800,Western blot结果显示抗体与8个血清型沙眼衣原体蛋白在40 kDa处特异性结合,免疫荧光染色证实该抗体可特异性结合沙眼衣原体.此外,MOMP抗体与进口商品化抗体明显共定位于宿主细胞内,且两种抗体荧光强度相当.结论 本研究成功制备效价高、特异性好的沙眼衣原体MOMP的兔多克隆抗体,为后续深入研究MOMP的生物学功能提供了有力工具.