松材线虫性别决定基因Bx-sex-1表达特征和生物学功能分析

[目的]揭示松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)性别决定基因Bx-sex-1的表达特征和生物学功能.[方法]通过Mega 6中的Jones-Taylor-Thornton(JTT)模型,采用邻接法(neighbor joining,NJ)对Bx-sex-1和其他线虫的氨基酸序列进行系统发育构建.采用同步培养的方法分别收集不同龄期的松材线虫并提取总RNA,反转录获得cDNA并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法,研究Bx-sex-1在松材线虫不同发育阶段的相对表达量.同时采用qRT-PCR并通过绝对定量法分析Bx-sex-1基因在雌虫和雄虫基因组的拷贝数.采用dsRNA浸泡法对目的基因进行干扰,观察松材线虫后代卵的孵化率和雌雄比的变化.[结果]系统进化树显示松材线虫Bx-sex-1和其他两个植物寄生线虫成为一支,与自由生线虫和寄生动物线虫分别进化为不同的分支.松材线虫Bx-sex-1在不同发育阶段相对表达量有差异,在卵期相对表达量最高,而在2龄幼虫时期最低,从2龄幼虫时期到成虫时期相对表达量逐渐升高.qRT-PCR结果显示Bx-sex-1基因在雌虫和雄虫基因组中均为单拷贝.Bx-sex-1被干扰后,卵的孵化率下降,雌雄比降低.[结论]松材线虫Bx-sex-1基因在卵的发育过程和性别决定中可能具有重要作用.