泛素特异性肽酶22调控乙型肝炎病毒X蛋白水平及功能

目的:探究泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase 22，USP22)与乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein，HBx)相互作用对HBx蛋白水平及其生物学功能的影响。方法:通过GST pull-down、免疫共沉淀以及激光共聚焦试验检测HBx与USP22的相互作用。瞬时转染USP22真核表达质粒或干扰USP22表达的siRNA，Western blot检测肝细胞中HBx蛋白表达水平的变化。以环己酰亚胺(cycloheximide，CHX)、蛋白酶体抑制剂MG132(carbobenzoxy-Leu-Leu-leucinal，MG132)分别处理转染后的细胞，检测HBx蛋白的降解速率。进一步通过细胞内泛素化试验检测USP22对HBx泛素化的影响，明确USP22影响HBx蛋白稳定性的具体机制。最后，以双荧光素酶报告试验和平板克隆试验检测USP22对HBx生物学功能的影响。结果:USP22与HBx存在相互作用。USP22显著增加HBx蛋白稳定性，并通过去除HBx的泛素化抑制HBx通过蛋白酶体降解，进而增强HBx的生物学功能。结论:USP22抑制HBx通过泛素依赖-蛋白酶体途径降解，增强HBx蛋白稳定性并促进HBx功能。