双重实时荧光PCR检测副溶血性弧菌毒力基因方法的建立和应用

目的 建立一种同时检测副溶血性弧菌两种毒力基因tdh和trh的双重荧光聚合酶链式反应(PCR)方法,并对我国2 771株食源性副溶血性弧菌携带的毒力基因进行全面检测.方法 针对副溶血性弧菌tdh和trh毒力基因分别设计荧光PCR引物和探针,优化荧光PCR反应体系及反应程序,建立可同时检测两种毒力基因的双重荧光PCR检测方法.应用所建方法对我国2015年和2016年分离的2 771株食源性副溶血性弧菌携带的毒力基因进行检测,并与PCR方法检测结果进行比对,评价方法的灵敏性、准确性和特异性.结果 建立的双重荧光PCR方法可同时检测tdh和trh两种毒力基因,其灵敏度达1.5×10-4 ng/μL,准确性和特异性均为100％.我国2015年食源性副溶血性弧菌中tdh和trh基因携带率分别为(0.26％,3/1 137;1.67％,19/1 137),2016年食源性副溶血性弧菌中tdh和trh基因携带率分别为(0.24％,4/1 634;0.43％,7/1 634).结论 本研究建立了一种同时检测副溶血性弧菌tdh和trh毒力基因的双重荧光定量PCR方法,能够快速、准确地筛查副溶血性弧菌毒力基因;我国食品来源副溶血性弧菌分离株tdh和trh毒力基因携带率较低;双重荧光PCR方法可应用于食品中副溶血性弧菌致病性研究,为我国居民膳食暴露副溶血性弧菌的风险评估工作提供科学数据.