环形泰勒虫ETIF2β蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

为研究环形泰勒虫真核翻译起始因子2 beta(Theileria annulata eukaryotic translation initiation factor 2 beta,ETIF2β)蛋白的功能,并制备其多克隆抗体,以环形泰勒虫裂殖体cDNA为模板,用PCR扩增ETlF2β基因片段.将ETIF2β基因片段与表达载体pET-30a(+)连接构建重组表达载体pET30a(+)-ETIF2β,经测序鉴定正确后,在大肠杆菌Rosetta(DE3)表达系统中表达.表达的蛋白纯化后用来免疫小鼠,制备特异性多克隆抗体.结果显示,PCR扩增的ETIF2β基因片段长约为723 bp,重组表达的ETIF2β蛋白的分子质量为38 ku.SDS-PAGE和Western-blot分析显示该蛋白主要以可溶性形式表达,并能与环形泰勒虫阳性血清发生特异性反应.用纯化的ETIF2β蛋白免疫小鼠获得了多克隆抗体,该抗体可与ETIF2β蛋白发生特异性反应.本研究成功表达了环形泰勒虫ETIF2β蛋白并制备了相应的多克隆抗体,为深入研究ETIF2β蛋白的功能奠定了基础.