岩藻聚糖硫酸酯F2靶向SGLT2的抗糖尿病肾病活性研究

目的 旨在从细胞水平上探讨岩藻聚糖硫酸酯F2对SGLT2的抑制作用及抗糖尿病肾病(DN)活性,并阐述其抗DN机制.方法 通过Q-Sepharose Fast Flow强阴离子交换层析法对墨角藻来源岩藻聚糖硫酸酯(FvF)进行分离纯化,并采用高效液相、离子色谱等方法测定其分子量、单糖组成、硫酸根含量等基本理化性质,利用流式细胞术,通过评价样品对SGLT2稳转细胞转运葡萄糖能力的影响,来分析样品对SGLT2的抑制活性,确定活性最优化合物.通过计算机模拟技术,探讨了岩藻寡糖与SGLT2的相互作用.采用大鼠肾系膜细胞(HBZY-1细胞),利用高糖诱导,建立HBZY-1细胞增殖模型,通过甲瓒蓝(MTT)法评价F2的抗DN活性,并利用Western Blot方法探究最优化合物对HBZY-1细胞模型中SphK1、NF-κB、p38、ERK1/2蛋白的影响.结果 纯化后获得了5个组分,SGLT2抑制剂筛选确定F2位最优组分,其具有分子量低、硫酸根含量高且单糖组成较为单一的特点,并且岩藻糖中硫酸根含量和聚合度影响其与SGLT2的相互作用,而2-硫酸岩藻八糖与SGLT2的亲和力最强.成功建立了HBZY-1细胞增殖模型,发现F2在较低浓度下即可发挥抗肾系膜增生作用,并且其活性随着浓度增加而增强,且F2是通过抑制SphK1、NF-κB、p38蛋白的表达及ERK1/2蛋白的磷酸化来发挥抗DN活性.