海藻糖替代部分甘油对延边黄牛冻融精子质量的影响

[目的]探讨是否可以通过补充海藻糖来降低冷冻保护剂中甘油的浓度,从而提高冻融精子的质量.[方法]分别用6％甘油(I组)及3％甘油+0、50、100和150 mmol/L海藻糖(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和V组)处理精子,用精子-微生物动(静)态图像检测分析系统(CASA)检测冻融精子的活力、质膜完整性和顶体完整性及动力学相关参数,筛选出最佳海藻糖处理浓度用于后续试验.通过Western blotting方法检测精子蛋白酪氨酸磷酸化水平评价精子获能状态,Hoechst 33342/PI/JC-1联合染色法检测精子的活率及线粒体膜电位,色霉素A3(CMA3)染色法检测精子DNA的完整性,部花青540(M540)和Yo-Pro-1染色检测精子膜脂质紊乱水平.[结果]与Ⅰ组相比,Ⅱ组精子的活力、质膜完整性、顶体完整性以及曲线速度(VCL)和直线率(STR)均显著下降(P＜0.05),Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组组精子的活力、VCL、直线速度(VSL)、平均路径速度(VAP)、直线性运动(LIN)和STR均显著升高(P＜0.05).因此,后续试验选用100 mmol/L海藻糖处理精子.与新鲜精子相比,冻融精子获能后其蛋白酪氨酸磷酸化的条带显著减少(P＜0.05),冻融精子的活率和线粒体膜电位均显著降低(P＜0.05);冻融活精子和死精子的高度膜脂质紊乱水平均显著升高(P＜0.05),100 mmol/L海藻糖可显著降低高度膜脂质紊乱水平(P＜0.05);冻融精子的鱼精蛋白缺失率显著增加(P＜0.05),且Ⅱ组和100 mmol/L海藻糖组精子的鱼精蛋白缺失率显著低于Ⅰ组(P＜0.05).[结论]海藻糖可作为一种新型冷冻保护剂降低甘油毒性,用100 mmol/L海藻糖替代部分甘油可显著改善延边黄牛冻融精子的质量.