Neuritin耳蜗支持细胞条件性敲除转基因小鼠模型的构建及鉴定

目的 应用Cre-LoxP重组酶系统构建Neuritin耳蜗支持细胞特异性敲除的Sox2-CreER:Neuritinflox/flox转基因小鼠模型,初步探讨敲除Neuritin对小鼠耳蜗听功能的影响.方法 采用Cre-LoxP重组酶系统,将Neuritinflox/flox小鼠和Sox2-CreER工具鼠进行饲养和繁殖,对其子鼠提取尾组织DNA,采用PCR方法鉴定小鼠基因型,获取基因型Sox2-CreER:Neuritinflox/flox即为耳蜗支持细胞条件性敲除Neuritin的转基因小鼠.对其进行听功能检测,选择听力正常的Sox2-CreER:Neuritinflox/flox小鼠作为实验小鼠,连续3 d腹腔注射tamoxifen诱导CreER发挥作用后,分别于诱导后第4和7天,检测Neuritin敲除小鼠的听力变化,并通过组织免疫荧光检测其耳蜗支持细胞中Neuritin的表达量,进一步验证Sox2-CreER:Neuritinflox/flox小鼠模型的构建效果.结果 成功构建耳蜗支持细胞条件性敲除Neuritin基因小鼠模型,该小鼠存活且有繁殖能力.听功能测试结果显示在耳蜗支持细胞内特异性敲除Neuritin基因的小鼠听力阈值与对照组相比明显上升(P＜0.05),但都处于正常听力范围内.耳蜗细胞组织形态与野生型相似,免疫荧光结果显示Sox2-CreER:Neuritinflox/flox小鼠耳蜗内Neuritin的表达量明显低于对照组.结论 应用Cre-LoxP重组酶系统成功构建了耳蜗支持细胞中条件性敲除Neuritin基因的Sox2-CreER:Neuritinflox/flox转基因小鼠模型,为在动物水平研究Neuritin在听力损失的可能恢复机制中的作用提供一定的研究平台基础.