棉蚜His-CYP6J1融合蛋白的分离纯化及多克隆抗体的制备
Biotechnology Bulletin（2017）
摘要
通过亲和层析法纯化棉蚜His-CYP6J1融合蛋白,制备及鉴定其多克隆抗体.采用镍离子金属螯合亲和层析柱分离纯化棉蚜His-CYP6J1融合蛋白,SDS-PAGE检测纯化产物.用纯化得到的His-CYP6J1融合蛋白免疫小鼠,制备抗棉蚜P450 CYP6J1多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体效价;免疫组化法检测抗血清特异性.结果表明,纯化的His-CYP6J1融合蛋白免疫小鼠后得到多抗血清,ELISA法检测抗血清效价达1:200000.免疫组化结果显示,此多克隆抗体能够与棉蚜P450 CYP6J1天然蛋白特异性结合,却在棉铃虫没有发现相应的结合反应.上述结果对研究棉蚜单一P450蛋白结构、功能及其在棉蚜抗药性形成过程的作用奠定基础.
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关键词
P450 CYP6J1 fusion protein,polyclonal antibody,protein purification
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