核酸染色剂GelRed在3种染色方法下的染色特点以及参与PCR反应的适用性

目的 探索GelRed在3种染色方法下的染色特点以及可否参与PCR反应.方法 采用前染色、凝胶中染色、后染色3种方法染色不同浓度、不同分子量及不同空间结构的DNA,使用ChemiDocXRS+凝胶成像系统进行检测,Image J与Image Lab软件分析.结果 GelRed后染色灵敏度较高,适合低丰度及较小分子量DNA样品的检测;而前染色GelRed随浓度的稀释使得线性DNA的移动速度变快,且会影响到DNA条带大小的判读,使用终浓度为1∶180的GelRed可以对300 ng以内的线性DNA进行前染色;GelRed与DNA复合物可以作为模板参与PCR反应,但是PCR体系中存在GelRed会对PCR反应产生严重的抑制.结论 选择合适的染色方式可以提高染色灵敏度,节约染色剂用量,优化染色结果;GelRed存在于PCR体系中可能会抑制DNA聚合酶活性.