全反式维甲酸抑制大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化信号通路中Fosl1直接调控PPARγ2

目的:研究激活蛋白1(AP-1)在全反式维甲酸(ATRA)抑制大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化信号通路中的调控机制.方法:采用SD大鼠原代BMSCs,体外分离、培养和成脂诱导.油红O染色鉴定细胞脂滴形成情况.应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脂肪细胞形成相关蛋白脂肪酸结合蛋白(FABP)、脂蛋白脂肪酶(LPL)、脂肪酸转运蛋白(CD36)、脂滴包被蛋白(perilipin)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)以及AP-1家族各成员(Fosl1、 Fosl2、 c-Fos、 c-Jun、 JunB、 JunD和FosB)的mRNA表达水平.Western blot检测相关蛋白的表达水平.染色质免疫共沉淀(ChIP)检测相关蛋白(RARγ和Fosl1)与PPARγ2基因是否存在相互作用.结果:油红O染色显示 ATRA处理组中细胞脂滴数量明显减少. BMSCs成脂诱导12 d后,与对照组相比,1 μmol/L ATRA处理组FABP、LPL、CD36、perilipin和PPARγ2的mRNA表达均显著降低.RT-qPCR检测AP-1家族各转录因子表达结果显示Fosl1在ATRA处理组成脂诱导第2天、第6天和第10天表达均显著升高.Westren blot结果表明ATRA处理组Fosl1蛋白表达水平显著升高,而PPARγ2蛋白表达降低.ChIP-qPCR实验发现Fosl1蛋白可结合在 PPARγ2基因启动子区域,而RARγ蛋白未直接结合在 PPARγ2基因启动子区域.结论:ATRA可抑制BMSCs成脂分化及脂质代谢相关蛋白的表达,可能与其通过上调Fosl1直接结合 PPARγ2基因启动子区域、下调PPARγ2表达有关.