Metformin与AMPKγ亚基结合位点的探究

目的:基于前期Metformin与AMPKγ亚基结合的研究,进一步确认二者间的结合机制.方法:采用分子对接方法模拟Metformin与AMPKγ亚基潜在的结合位点,通过定点突变技术对AMPKγ亚基进行修饰,以荧光滴定法为检测方法,检测Metformin对突变前后的AMPKγ内源荧光猝灭的改变.结果:获得一系列AMPKγ亚基的突变体AMPKγ M84A、T88A、D89A、R117A、K126A及 I149A,比较发现Metformin与AMPKγ的解离常数KD值为(3.76 ± 0.45)μmol/L,与突变体AMPKγ T88A的KD值约为未突(36.15 ± 6.91)μmol/L,约为变前的10倍,提示88位中的苏氨酸T可能是Metformin的结合位点之一.结论:该结果一方面阐明Met-formin与AMPKγ的结合情况,另一方面也为以AMPKγ亚基为靶点的抗肿瘤药物设计提供理论指导.