伽氏疏螺旋体尚志株P66基因的原核表达与鉴定

为获得伽氏疏螺旋体尚志株（B ．garinii SZ）的 P66蛋白，本研究从培养的螺旋体菌液中提取总 RNA，反转录合成第一链 cDNA，利用 PCR 扩增 P 66基因。将目的片段连接表达载体 pET-30a（＋），并转化大肠杆菌表达菌 BL21（DE3），经 PCR、双酶切及测序验证正确后，进行 IPTG 诱导表达和纯化，然后将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体。SDS-PAGE 结果显示，获得约70 ku 的表达产物；Western blotting 分析表明，表达产物与抗 His 标签的小鼠单克隆抗体、螺旋体鼠源阳性血清、兔抗 P66多克隆抗体均能发生反应，获得的多克隆抗体也可识别天然蛋白。本试验成功表达了 B ．garinii SZ 株 P66蛋白，并制备了多克隆抗体，为后续 B ．garinii SZ 株P66蛋白的功能研究奠定了基础。