猪δ冠状病毒Nsp5的体外表达及其蛋白酶活性分析

猪δ冠状病毒（Porcine deltacoronavirus, PDCoV）是一种新发现的肠道冠状病毒，可引起仔猪的腹泻。冠状病毒编码的非结构蛋白Nsp5是一种3C样蛋白酶，在病毒多聚前体蛋白加工以及免疫调节中发挥重要作用。本研究以PDCoV CHN-HN-2014株为模板，通过RT-PCR扩增Nsp5基因并将其克隆到原核表达载体pET-28a（+）中，构建了重组表达质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导后SDS-PAGE检测，结果表明Nsp5可在大肠杆菌中高效、可溶性表达。采用镍亲和层析对表达的Nsp5蛋白进行纯化，并通过荧光共振能量转移方法检测了其蛋白酶活性，结果表明纯化的Nsp5蛋白能够有效切割含有PDCoV Nsp5氨基端自切割位点的十二肽底物，证实体外表达的Nsp5重组蛋白具有良好的蛋白酶切割活性。猪δ冠状病毒Nsp5蛋白的克隆、表达及其蛋白酶活性检测，为深入研究该蛋白的功能奠定了基础。