鹅星状病毒SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法的建立

为建立快速检测鹅星状病毒(GAstV)的方法,本研究根据GenBank中GAstV ORF2基因序列设计1对特异性引物,构建重组质粒pMD19-T-GAstV,以其作为标准品建立了GAstV的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法.优化其反应条件及体系,进行特异性、敏感性和重复性试验以及临床样本检测.试验结果显示,除GAstV外,禽白血病病毒(ALV)、血清4型禽腺病毒(FAdV-4)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)和鸡传染性贫血病病毒(CIAV)等常见禽病病原利用该方法检测均呈阴性,表明其特异性良好;建立的荧光定量RT-PCR检出的最低模板含量为1μl 3.75×101拷贝,敏感性较高;组内和组间重复性试验变异系数均小于1％.利用该方法对来自安徽地区的32份临床样品进行检测,阳性检出率为43.75％,常规PCR方法阳性检出率为18.75％,阳性检出符合率100％,表明该方法可用于临床样品检测.该方法的建立为临床样品中GAstV的快速高效检测提供了技术支持.