微小RNA-218通过生存素对胆管癌细胞的作用

目的 检测微小RNA(miR)-218对胆管癌细胞的侵袭的影响及miR-218通过凋亡抑制基因生存素(Survivin)对胆管癌细胞的作用.方法 培养两种胆管癌细胞株(CCLP1)和(QBC939),将miR-218mimics(miR-218激动剂)及阴性对照转染CCLP1和QBC939细胞,设立miR-218组、阴性对照组及空白对照组,采用BD Martigel基底膜基质胶侵袭室测定其侵袭性,每组随机抽取3个结果.将CCLP1和QBC939细胞分别共转染miR-218 mimics和pMIR-Survivin、miR-218mimics和pMIR-Survivin-mut.分别设立miR-218组、阴性对照组及空白对照组,每组随机抽取3个结果,酶标仪检测荧光素酶活性,探讨miR-218与Survivin的相关性.结果 CCLP1细胞株中miR-218组细胞数为(28.33 ±4.16)个,阴性对照组细胞数为(72.00 ±8.72)个,NC组细胞数为(74.33±4.04)个;QBC939细胞株中miR-218组细胞数为(7.33±2.08)个,阴性对照组细胞数为(22.00±4.36)个,NC组细胞数为(22.00±4.00)个;与阴性对照组和NC组比较,转染miR-218mimics处理能显著抑制胆管癌细胞的侵袭能力,差异有统计学意义(CCLP1细胞株和QBC939细胞株其P值分别为0.000、0.004).荧光素酶活性检测结果显示,QBC939野生型miR-218组荧光素酶活性为1.489±0.079,阴性对照组为2.825±0.068,NC组为2.747±0.081;QBC939突变型miR-218组荧光素酶活性为3.078±0.138,阴性对照组为2.944±0.144,NC组为2.807±0.090;CCLP1野生型miR-218组荧光素酶活性为1.322±0.039,阴性对照组为2.362±0.129,NC组为2.368±0.154;CCLP1突变型miR-218组荧光素酶活性为2.202±0.073,阴性对照组为2.274±0.250,NC组为2.202±0.073;野生型的3'端非编码区(3'UTR)的报告基因载体的荧光素酶活性与其阴性对照组及空白对照组比较显著下降,差异有统计学意义(CCLP1细胞株和QBC939细胞株其P值分别为0.000、0.000),突变型无显著变化.结论 miR-218抑制胆管癌细胞的侵袭,在胆管癌的发生发展中起负性调节作用.miR-218可直接与Survivin 3'UTR相互作用,miR-218对于胆管癌的负性调节作用可能是直接通过Survivin发挥作用.