五个结核分枝杆菌重组蛋白及其组合物的细胞免疫评价

目的:对5个结核分枝杆菌重组蛋白及其组合物的细胞免疫进行评价。方法:88份新鲜肝素抗凝人群外周静脉血液，其中42份来自北京市昌平区结核病防治所就诊的结核病患者，46份健康志愿者由中国疾病预防控制中心传染病所提供，均为接种过卡介苗（BCG）且没有结核暴露史和任何临床症状体征的健康人。以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv DNA为模板，PCR扩增选取的5个重组蛋白Rv3874、Rv3875、Rv2031c、Rv1411c和Rv3418c的完整编码基因；通过基因重组和蛋白纯化技术，分别克隆、表达和纯化5个重组蛋白作为刺激物，采用效应T细胞酶联免疫斑点试验（ELISPOT）对人群进行细胞免疫检测。结果:成功克隆、表达和纯化了Rv3874、Rv3875、Rv2031c、Rv1411c和Rv3418c重组蛋白；灵敏度分别为50.00%、71.43%、69.04%、73.81%和76.19%；特异度分别为86.96%、76.09%、71.74%、39.13%和36.96%。阳性预测值、阴性预测值、曲线下面积及约登指数分别为52.46%~77.78%、62.96%~74.47%、0.511~0.754和0.129~0.475。除Rv1411c和Rv3418c外，Rv3874、Rv3875和Rv2031c在结核病患者中检测到的斑点形成细胞数均高于健康志愿者，差异均具有统计学意义（ P值均<0.001）。在5个重组蛋白所构成的26种组合物中，灵敏度为80.95%~95.24%，特异度为68.89%~24.44%。随着组合物中重组蛋白个数的增加其灵敏度逐渐增加，但特异度随之下降。 结论:结核分枝杆菌重组蛋白Rv3874、Rv3875和Rv2031c刺激T细胞产生免疫应答的能力较强，具有一定的抗原性。而Rv1411c和Rv3418c单独用作诊断抗原的效能并不理想，与多组分抗原联合构成的组合物具有一定应用价值。