原代培养人毛乳头细胞cDNA酵母表达文库的构建和鉴定

目的 构建原代培养人毛乳头细胞cDNA酵母表达文库.方法 采用二步酶消化法分离正常人毛乳头细胞并置于DMEM培养基中培养;待细胞出现凝集性生长特性后,收集细胞并提取总RNA,采用CloneMinerTM cDNA Library Construction Kit试剂盒构建初级cDNA文库及cDNA酵母表达文库.结果 初级文库的平均滴度为7.0×106 cfu/ml,文库总容量为1.4×107 cfu(colony-forming unit).cDNA酵母表达文库的平均滴度为5.5×106 cfu/ml,文库总容量为1.1×107 cfu;菌落PCR验证鉴定平均插入片段大于1.2 kb,重组率大于95%.结论 成功构建原代人毛乳头细胞cDNA酵母表达文库,为应用酵母双杂交筛选毛乳头细胞中与HSPC016相互作用的蛋白奠定基础.