抗菌肽Cecropin D在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定

目的 在毕赤酵母GS115中表达抗菌肽Cecropin D,并检测其抗菌活性.方法 根据毕赤酵母密码子的偏爱性,人工合成6条寡聚核苷酸片段,经磷酸化、退火、连接并克隆入酵母表达载体pPIC9K.重组表达质粒pPIC9K-D转化至毕赤酵母菌GS115,经G418筛选.阳性高拷贝克隆用0.5%的甲醇诱导表达,表达产物经CM-Sepharose层析柱纯化,Tricine-SDS-PAGE分析,琼脂糖扩散法和比浊法测定其抗菌活性.结果 经Tricine-SDS-PAGE检测,在相对分子质量3 900左右处可见目的 蛋白表达条带,纯化后的目的 蛋白纯度达90%以上,获得的抗菌肽Ceeropin D对一些革兰阳性菌和革兰阴性菌均有抑菌活性.结论 抗菌肽Ceeropin D成功地在毕赤酵母中分泌表达,为以后深入研究抗菌肽奠定了基础.