Dot-ELISA检测H9亚型禽流感病毒的研究

本研究采用兔抗H9亚型禽流感病毒(AIV)IgG包被于硝酸纤维素膜,酶标羊抗兔IgG作二抗,建立检测H9亚型AIV的Dot-ELISA法。经方阵试验确定兔抗AIVIgG工作浓度为1∶400,酶标羊抗兔IgG的工作浓度为1∶400。作者建立的Dot-ELISA对AIV的最小检测量为3.35×10-9g。Dot-ELISA与HA和HI、AGP及病毒分离法相比,检测63份临床疑似H9亚型AIV病料,Dot-ELISA检出32份(57.14%),HA和HI检出15份(23.81%),AGP检出11份(17.46%),病毒分离检出38份(60.30%)。用抗H9亚型AIV阳性血清可以阻断Dot-ELISA阳性反应,诊断膜片与鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征病毒不出现阳性反应,证明Dot-ELISA特异性好。分别置室温(25℃左右)、4℃和-20℃下保存1个月后,膜片诊断效果不变,对照反应均成立,该方法重复性好(重复符合率为93.9%),操作简便(3 h内可完成),不需要特殊检测仪器,结果客观,肉眼易于判断,是微生物和传染病及寄生虫病诊断标准化的新技术之一。